Comment cultiver des cellules apicoplaste d’un parasite dans une culture
apicoplastes sont un type de organite intracellulaire présent dans parasites unicellulaires qui causent des maladies graves comme le paludisme , toxoplasmose et coccidiose . Organites sont des structures complexes dans une cellule qui ne peuvent pas se développer et se reproduire par eux-mêmes . Ils ont surgi quand un ancêtre des parasites englouti un autre organisme , qui a été probablement lié à des algues rouges . Parce apicoplastes sont pas des cellules indépendantes , elles ne peuvent être cultivées dans une culture par eux-mêmes . Pour le faire il faut cultiver les parasites . Ce qui suit sont des instructions à la culture du stade de globules rouges dans le sang de Plasmodium falciparum, responsable malaria.Things dont vous aurez besoin
Parasite stock
milieu RPMI 1640 de culture
hotte à flux laminaire
autoclave de AlbuMAX substitut de sérum II Photos D -glucose
hypoxantine
HEPES
Le sulfate de gentamicine
flacons Culture
cellulaire incubateur
globules rouges
afficher Instructions
la culture de Plasmodium falciparum
1
Définir l’incubateur de cellules à 37 degrés Celsius et d’ajuster la composition du gaz à 1 pour cent d’oxygène , 3 pour cent de dioxyde de carbone , et 96 pour cent d’azote .
2 < p . > autoclave tous les équipements et matériaux non – stérile
3
Travailler dans la hotte à flux laminaire pour maintenir la stérilité , préparer le milieu final de ce qui suit dans le milieu de culture RPMI 1640 :
D-glucose à une concentration finale de 20 mM.
hypoxantine à une concentration finale de 0,2 mM.
HEPES à une concentration finale de 25 mM.
le sulfate de gentamicine à une concentration finale de 25 mg /L.
AlbuMAX II à une concentration finale de 0,5 pour cent p /v
4
Distribuer le montant total de milieu fait en l’étape précédente en autant de flacons de culture comme souhaité et de les placer sur l’agitateur dans l’incubateur .
5
fois la moyenne a atteint 37 degrés Celsius , ajouter le parasite actions.
6
Changer le milieu de culture tous les jours pour garder les parasites bien nourris et vivants .
7
Ajouter globules rouges tous les deux jours . Ils seront infectées par les nouveaux parasites qui sont générés dans la culture . Si elles deviennent trop nombreux pour un ballon , diviser son contenu en deux ou plusieurs autres petits.