Méthodes pour un système hybride de levure Trois
réplication des chromosomes , la transformation de l’ARN messager , la traduction des protéines , et des décisions critiques dans les premiers stades de développement dépendent de l’interaction de l’ADN , l’ARN et les protéines . Ces interactions sont les processus biologiques fondamentaux de l’expression du gène et la synthèse protéique . Les scientifiques utilisent souvent Saccharomyces cerevisiae , les mêmes espèces de levures utilisées dans la cuisson et le brassage , pour étudier les gènes qui codent pour des protéines spécifiques et d’analyser les interactions entre les protéines et autres molécules . Le système à trois hybrides de levure est l’une des trois variantes du système à deux hybrides de levure utilisée pour étudier ces interactions . Le système à deux hybrides
La méthode du double hybride est utilisé pour détecter des interactions protéine-protéine par la recherche de l’expression d’un gène rapporteur. De nombreuses protéines ont au moins deux domaines ou des unités structurelles et fonctionnelles distinctes . GAL4 , une protéine présente dans Saccharomyces cerevisiae , possède un domaine de liaison à l’ADN ( DBD ) et un domaine d’activation (AD ) . Dans ce procédé, une protéine hybride est fusionnée à l’ DBD et un second à l’ AD . Aucun gène rapporteur est exprimé par la fusion de seulement un des hybrides . Comme le gène GAL4 rapporteur est exprimé uniquement lorsque les deux hybrides sont présents , l’interaction protéine-protéine est indiqué .
Le système des trois – hybride
la méthode des trois hybrides identifie un gène rapporteur pour détecter l’interaction de la protéine avec de l’ARN . La première protéine hybride se compose d’un DBD fusionné directement à un domaine de liaison à l’ARN. La seconde consiste en l’ AD du facteur de transcription GAL4 lié à une protéine de liaison d’ARN . Les domaines de liaison à l’ARN d’interagir avec une molécule hybride d’ARN qui se lie les deux protéines hybrides pour former un complexe . La formation du complexe déclenche l’ expression du gène rapporteur GAL4 . Depuis le gène rapporteur est activée uniquement par la formation du complexe triple-hybride , sa présence indique l’interaction de l’ARN et des protéines.
Le système One- hybride
Procédé un hybride est utilisé pour détecter l’interaction de la protéine avec l’ADN. Un système un hybride allie une protéine unique , qui relie l’ AD directement au DBD . Au lieu d’identifier un gène rapporteur , ce procédé semble pour une protéine spécifique qui doit reconnaître une séquence cible d’ ADN . La présence de la protéine spécifique indique l’interaction de la protéine avec l’ADN.
Le système One-Two Hybrid
Le une-deux méthode hybride est utilisée pour étudier la protéine protéine et des interactions protéine-ADN simultanément. Utilisation de souches de levure nouvellement mis au point , ce procédé met en oeuvre le gène rapporteur GAL4 pour identifier les interactions protéine-protéine et un consensus de p53 pour identifier les interactions protéine – ADN . On prévoit que la méthode pour augmenter de manière significative la précision des résultats expérimentaux en réduisant l’apparition de faux positifs obtenus dans d’autres systèmes hybrides .