Avantages et inconvénients de Western Blot

Western blot , une technique d’analyse utilisée pour identifier une protéine spécifique dans un échantillon donné , emploie la capacité d’une enzyme ou d’un anticorps primaire marqué par fluorescence se lier à son antigène spécifique . Il s’agit d’un processus en trois étapes en commençant par une électrophorèse sur gel , suivie d’une membrane de transfert et le sondage avec des anticorps . La détection de la protéine peut être direct ou indirect , avec ce dernier au moyen d’un anticorps secondaire marqué dirigé contre le premier . Bien que reconnu comme une technique d’analyse des protéines de routine , Western blot a des limites ainsi que des avantages . Avantage: Sensibilité

Un des plus grands arguments en faveur de western blot est sa sensibilité . En raison de sa capacité à détecter aussi peu que 0,1 ng de protéine dans un échantillon, cette technique peut théoriquement être un outil de diagnostic précoce et efficace , à détecter la moindre réponse immunogène d’un virus ou d’une bactérie dans un échantillon de patient . Un transfert de type western en outre indirect s’appuie sur cette sensibilité de la capacité de l’ anticorps secondaire à amplifier l’intensité du signal détecté par le système d’imagerie . Signifie une plus grande sensibilité que moins d’anticorps sont nécessaires pour les tests , ce qui réduit les coûts de laboratoire significativement
Avantage: . Spécificité

La technique western blot doit sa spécificité à deux gros contributeur facteurs. Tout d’abord, l’électrophorèse sur gel trie un échantillon en protéines de taille différente , la charge et la conformation. Ce processus est en soi un grand pas vers la détection , comme des bandes formés dans le gel donnent déjà des indices sur la taille de la protéine ou polypeptide d’intérêt . La spécificité de l’ interaction anticorps – antigène sert de deuxième facteur important. Parce que les anticorps spécifiques présentent une affinité pour les protéines spécifiques , le processus peut détecter sélectivement une protéine cible , même dans un mélange de 300 000 protéines différentes
Inconvénient: . Enclin à des résultats faux ou subjectives

En dépit de sa sensibilité et de spécificité , un western blot peut encore produire des résultats erronés . A de faux résultats positifs lors d’un anticorps réagit avec une protéine non conforme , ce qui arrive souvent quand un patient testé pour le VIH arrive à avoir la tuberculose ou un certain nombre d’ infections parasitaires . Un faux négatif , d’autre part , peut facilement entraîner des grosses protéines ne sont pas suffisamment de temps pour transférer correctement à la membrane . Une mauvaise blot et le traitement produisent souvent biaisée , fané , ou même plusieurs bandes , rendant les résultats des tests soumis à l’interprétation du technicien
Inconvénient: . Coût élevé et la demande technique

Le coût d’un western blot est un composite de grandes dépenses individuelles pour les anticorps marqués , les analystes spécialisés et de matériel de laboratoire . Un processus délicat , western blot exige de la précision à chaque étape de l’identification correcte des constituants d’un échantillon . Une erreur mineure dans la concentration réactif ou en période d’incubation peut être désastreux pour l’ensemble du processus . Enfin , l’équipement nécessaire pour la détection et l’imagerie – les systèmes de détection laser chimioluminescent, fluorescent, radioactif , ou – peut -être trop cher pour l’unité de microbiologie moyenne

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